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报告概述

本报告介绍Portal的机械穿孔（Boosting）技术，该技术通过微流体挤压将分子直接递送到活细胞内，使药物活性与透膜性脱钩。报告涵盖技术原理、递送效率、细胞活性及与常用检测试剂（如Promega NanoBRET、LgBiT/HiBiT）的兼容性。同时展示了Galaxy-i系统与自动分液集成的高通量筛选能力，以及在大环化合物、寡核苷酸、蛋白等不同分子类型上的应用案例。报告还包含了与Merck、AbbVie等药企的合作验证数据，证明该技术可支持早期生物学筛选、活细胞动力学和结合数据获取，降低候选药物风险并节省药物化学成本。

报告的核心结论

机械穿孔技术使药物活性与透膜性脱钩

报告指出，通过机械穿孔可将分子直接递送到活细胞中，从而不再依赖分子的固有透膜性，使得原本透膜性差的候选分子也能在细胞内发挥活性，为药物化学提供更大的结构优化空间。

技术可实现DNA编码化合物库（DEL）在活细胞内的直接筛选

Portal的机械穿孔技术能将DNA编码化合物库递送到原代细胞和干细胞中，保留靶点天然构象，实现活细胞水平的筛选。与传统生化筛选相比，可获得更接近生理条件的结合数据，提高命中率。

技术兼容多种检测体系，支持高通量筛选

报告显示，Portal技术与NanoBRET、LgBiT/HiBiT、NanoBiT等常用检测试剂兼容，可实时监测活细胞内的靶点结合、蛋白降解等事件。Galaxy-i系统可集成自动分液，能在96孔和384孔板上实现稳定递送，满足高通量需求。

机械穿孔能够递送多种分子类型且保持细胞活性

报告展示了大环化合物、mRNA、蛋白质、抗体、寡核苷酸等多种分子在多种细胞系（如HEK293、HeLa、iPSC、PBMC）中的成功递送，递送效率高且细胞活性通常保持在80%以上，表明技术通用性好。

报告回答的关键问题

机械穿孔技术如何解决药物透膜性问题？

报告指出，机械穿孔技术通过微流体挤压在细胞膜上产生瞬时孔洞，将分子直接递送到细胞质中，无需依赖分子自身的透膜性。这使得原本因透膜性差而被淘汰的候选分子（如大环化合物、极性分子）也能进入细胞，从而扩大可成药靶点空间。

Portal技术能否用于原代细胞的递送？

是的，报告展示了采用Portal技术将mRNA递送到人iPSC和CD34+造血干细胞中，并将DNA编码化合物库（DEL）递送到PBMC（外周血单核细胞）中，递送后细胞活性良好，说明该技术适用于难转染的原代细胞。

如何利用Portal技术进行PROTAC的活细胞活性评估？

报告显示，利用Portal技术将PROTAC分子递送到表达HiBiT标记靶蛋白的细胞中，通过添加LgBiT实现发光检测，可实时监测蛋白降解动力学。此外，结合NanoBRET或NanoBiT技术，可评估三元复合物形成、泛素化及蛋白酶体招募等事件，为PROTAC优化提供细胞学证据。

Portal技术是否适合高通量药物筛选？

报告指出，Galaxy-i系统可以与自动分液设备（如PreciseDrop II）集成，在96孔和384孔板上实现一致性的递送，递送效率与手工处理相当。该系统已用于多个浓度梯度和重复实验，证明了其高通量筛选的适用性。

报告中的代表性数据

12.5倍

DEL递送后HEK293T细胞中富集倍数

资料未明确，通过qPCR定量，Portal递送后DEL在HEK293T细胞中的富集程度达到12.5倍，显示高效的细胞内递送。

R² = 0.93

PBMC中DEL递送后的Spearman相关性

资料未明确，在PBMC细胞中，比较经Portal递送后的DEL富集排名与已知配体结合数据的相关性，Spearman R²为0.93，表明递送后的DEL筛选数据可靠。

＞80%

大环化合物递送后细胞活性保持率

资料未明确，在HEK293细胞中，以高达0.2 mg/ml的大环化合物-FITC进行递送，细胞活性仍保持在80%以上，表明技术对细胞毒性低。

以上数据根据报告摘要整理，具体统计口径和数值请以完整报告原文为准。

完整报告包含什么

  • 技术原理详解：报告详细描述了机械穿孔（Boosting）的物理机制，包括细胞挤压、膜孔形成与恢复过程，以及与电转、微注射等传统方法的比较。
  • 多种分子类型的递送数据：提供了大环化合物、mRNA、DNA编码化合物库、蛋白质（如抗体、酶）、寡核苷酸等在不同细胞系中的递送效率与细胞活性图表。
  • 与检测试剂兼容性验证：展示了Portal技术与Promega NanoBRET、LgBiT/HiBiT、NanoBiT以及Lumit等检测体系的适配结果，包括动力学曲线和剂量反应。
  • 高通量筛选系统Galaxy-i的介绍：包含Galaxy-i系统的硬件设计、与自动分液器（如PreciseDrop II）的集成方案，以及96/384孔板一致性验证数据。
  • 合作应用案例：与Merck、AbbVie等药企的合作研究，涉及小分子抑制剂、PROTAC、分子胶等项目的细胞内活性评估。
  • MilliBooster放大系统：介绍了用于大规模细胞工程的MilliBooster系统，可与Fresenius Kabi的Lovo细胞处理系统联用，实现高体积的细胞递送。
  • 参考文献列表：报告末尾列出了相关科学文献和技术白皮书，供读者进一步深入了解技术背景。

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